Tahap pembuatan stok dan starter mikroba

Pembuatan stok mikroba dilakukan dengan menyiapkan media NA miring, media tersebut dilarutkan dengan akuades kemudian dipanaskan sampai mendidih. Selanjutnya media tersebut dituang sebanyak 5 ml ke dalam tabung reaksi dan di sterilkan dengan autoklaf 121 C selama 15 menit. Kemudian media tersebut dimiringkan. Biakan koloni diinokulasikan bila media agar tersebut telah dingin dan memadat.

Pembuatan starter mikroba dilakukan dengan cara menyiapkan kultur bakteri dalam media broth dengan komposisi NB + glukosa 1% sebanyak 100 ml dalam 4 tabung erlenmeyer. Biakan murni ditumbuhkan dengan mengambiol dua ose(dari agar miring), kemudian dimasukkan dalam media broth yang dilakukan secara aseptik dan diinkubasi pada suhu ruang selama 2 hari.

Tahap pembuatan inokulum mikroba dalam media molase

Pembuatan media produksi bakteri dilakukan dengan cara menyiapkan media broth dengan komposisi molase 2% dalam 100 ml akuades sebanyak 4 tabung erlenmeyer. Autoklaf media tersebut pada suhu 121 C selama 15 menit.

Untuk pembuatan mikroba tungggal: starter mikroba diinokulasiikan sebanyak 30 ml ke dalam 100 ml media molase yang dilakukan secara aseptik.

Untuk pembuatan campuran : starter mikroba diinokulasikan sebanyak 10 ml dari masing-masing starter ke dalam 100 ml media molase yang dilakukan secara aseptik.

Inkubasi pada suhu ruang selama 2 hari.

Setelah diinkubasi selama 2 hari, jumlah bakteri pada media molase dihitung menggunakan metode TPC

FARIDA, 2009, BIOFERTILISASI Rhizobium pada pertumbuhan dan produksi tanaman kedelai (Glycine max (L.) Merr.), SKRIPSI, Universitas Airlangga, Surabaya.